TECNOLOGIE DEL DNA RICOMBINANTE

Molecole di DNA ricombinante:  molecole di DNA composte da sequenze di diversa origine.

Tecnologia del DNA ricombinante: complesso di metodiche che utilizza molecole di DNA ricombinante per l´indagine in biologia molecolare e in genetica.
L´applicazione di questa tecnologia allo studio dei geni è detta ingegneria genetica.

La tecnologia del DNA ricombinante ha permesso il clonaggio molecolare, ossia l´ottenimento di un insieme di molecole tutte identiche ad una molecola originale, mediante l´amplificazione all´interno di cellule batteriche ospiti (in vivo).
Il clonaggio molecolare è anche possibile con l´amplificazione in vitro mediante la reazione a catena della polimerasi (PCR).

Chimico-Fisica

Soluzioni
Temperatura
Gravità
Corrente elettrica

Affinità
Ibridizzazione

Biochimica

Reazioni enzimatiche

Biologia

Colture cellulari

Batteri
Fagi
Cellule eucariotiche
Retrovirus

Informatica

 Analisi di sequenza

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ENZIMI

* L´attività enzimatica dev´essere purificata e attiva.

* I substrati devono essere purificati ed in concentrazione adatta.

* Deve essere presente una opportuna soluzione salina tampone.

* La reazione deve svolgersi alla temperatura adeguata e per il tempo necessario.

* Non devono essere presenti sostanze inibitrici.
 

Enzimi di restrizione

Enzimi di metilazione

Polimerasi; Trascrittasi inversa

Trasferasi terminale, ligasi, chinasi e fosfatasi

Nucleasi
 

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Bibliografia

FONTI GENERALI DI INFORMAZIONE

Libri: esistono alcune raccolte di procedure universalmente riconosciute come fonte autorevole per i protocolli comunemente impiegati nella ricerca in genetica molecolare.
Esistono anche molti libri di carattere tecnico/applicativo specificamente orientati ad una determinata metodica.

Letteratura scientifica: reso pubblico dal 1997, PubMed è un archivio consultabile per parole chiave che comprende milioni di indicazioni bibliografiche e di riassunti degli articoli scientifici pubblicati su circa 3000 riviste biomediche dal 1966 a oggi.

Archivi metodologici "on-line": sono disponibili su Internet raccolte di protocolli e informazioni metodologiche di interesse per i biologi molecolari.

Newsgroups: aree di discussione accessibili in Internet per lo scambio di informazioni. Il gruppo:
BIOSCI - Molecular Biology: Methods and Reagents è una raccolta di alta qualità di domande e risposte sui più disparati argomenti di biologia molecolare.

I cataloghi commerciali, i bollettini tecnici (riviste di tema applicativo curate da ditte) e i manuali tecnici (letteratura allegata ai prodotti commerciali con istruzioni dettagliate per il loro impiego), sebbene evidentemente "schierati", possono essere fonti molto utili di informazioni. Molte aziende•rendono disponibili queste fonti anche sul Web.

Atti di congressi: possono contenere in anteprima informazioni non ancora pubblicate in forma di articolo scientifico.

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LETTURE

Rainbow, "Fare scienza oggi", Feltrinelli 1999.
La scoperta della PCR presentata come caso esemplare di storia della industria biotecnologica.

Thompson, "Correggere il codice", Garzanti 1996.
Una interessante panoramica della storia della genetica molecolare alla luce della storia del primo tentativo di terapia genica.